Ang pine nematode ay isang quarantine migratory endoparasite na kilala na nagdudulot ng matinding pagkalugi sa ekonomiya sa mga ecosystem ng pine forest. Sinusuri ng kasalukuyang pag-aaral ang aktibidad ng nematicidal ng mga halogenated na indoles laban sa mga pine nematode at ang kanilang mekanismo ng pagkilos. Ang mga aktibidad ng nematicidal ng 5-iodoindole at avermectin (positibong kontrol) laban sa mga pine nematode ay magkatulad at mataas sa mababang konsentrasyon (10 μg / mL). Nabawasan ng 5-iodoindole ang fecundity, aktibidad ng reproduktibo, pagkamatay ng embryonic at larval, at pag-uugali ng lokomotor. Ang mga molekular na pakikipag-ugnayan ng mga ligand na may invertebrate-specific glutamate-gated chloride channel receptors ay sumusuporta sa paniwala na ang 5-iodoindole, tulad ng avermectin, ay mahigpit na nagbubuklod sa receptor active site. Ang 5-Iodoindole ay nag-udyok din ng iba't ibang mga phenotypic na deformation sa mga nematode, kabilang ang abnormal na pagbagsak/pag-urong ng organ at pagtaas ng vacuolization. Ang mga resultang ito ay nagmumungkahi na ang mga vacuole ay maaaring gumanap ng isang papel sa nematode methylation-mediated na kamatayan. Mahalaga, ang 5-iodoindole ay hindi nakakalason sa parehong uri ng halaman (repolyo at labanos). Kaya, ipinapakita ng pag-aaral na ito na ang paggamit ng iodoindole sa ilalim ng mga kondisyon sa kapaligiran ay maaaring makontrol ang pinsala sa pagkalanta ng pine.
Ang pine wood nematode (Bursaphelenchus xylophilus) ay kabilang sa pine wood nematodes (PWN), migratory endoparasitic nematodes na kilala na nagdudulot ng matinding pinsala sa ekolohiya sa mga pine forest ecosystem1. Ang sakit na pine wilt (PWD) na dulot ng pine wood nematode ay nagiging isang seryosong problema sa ilang kontinente, kabilang ang Asia at Europe, at sa North America, sinisira ng nematode ang mga ipinakilalang pine species1,2. Ang pagbaba ng puno ng pino ay isang pangunahing problema sa ekonomiya, at ang pag-asa ng pandaigdigang pagkalat nito ay nakakabahala3. Ang mga sumusunod na pine species ay pinaka-karaniwang inaatake ng nematode: Pinus densiflora, Pinus sylvestris, Pinus thunbergii, Pinus koraiensis, Pinus thunbergii, Pinus thunbergii, at Pinus radiata4. Ang pine nematode ay isang malubhang sakit na maaaring pumatay sa mga puno ng pino sa loob ng ilang linggo o buwan pagkatapos ng impeksyon. Bilang karagdagan, ang mga paglaganap ng pine nematode ay karaniwan sa iba't ibang ecosystem, kaya naitatag ang patuloy na mga chain ng impeksyon1.
Ang Bursaphelenchus xylophilus ay isang quarantine plant-parasitic nematode na kabilang sa superfamily na Aphelenchoidea at clade 102.5. Ang nematode ay kumakain ng fungi at nagpaparami sa mga tisyu ng kahoy ng mga puno ng pino, na nagiging apat na iba't ibang yugto ng larval: L1, L2, L3, L4 at isang adult na indibidwal1,6. Sa ilalim ng mga kondisyon ng kakulangan sa pagkain, ang pine nematode ay pumasa sa isang espesyal na yugto ng larval - dauer, na nagiging parasito sa vector nito - ang pine bark beetle (Monochamus alternatus) at inililipat sa malusog na mga puno ng pino. Sa malusog na mga host, ang mga nematode ay mabilis na lumilipat sa pamamagitan ng mga tisyu ng halaman at kumakain sa mga parenchymatous na mga selula, na humahantong sa isang bilang ng mga reaksyon ng hypersensitivity, pine wilting at pagkamatay sa loob ng isang taon pagkatapos ng impeksyon1,7,8.
Matagal nang naging hamon ang biyolohikal na pagkontrol sa mga pine nematode, na may mga hakbang sa quarantine na itinayo noong ika-20 siglo. Ang mga kasalukuyang estratehiya para sa pagkontrol sa mga pine nematode ay pangunahing kinasasangkutan ng mga kemikal na paggamot, kabilang ang pagpapausok ng kahoy at pagtatanim ng mga nematicides sa mga puno ng kahoy. Ang pinakakaraniwang ginagamit na nematicides ay avermectin at avermectin benzoate, na kabilang sa pamilyang avermectin. Ang mga mamahaling kemikal na ito ay lubos na epektibo laban sa maraming uri ng nematode at itinuturing na ligtas sa kapaligiran9. Gayunpaman, ang paulit-ulit na paggamit ng mga nematicides na ito ay inaasahang lilikha ng presyon ng pagpili na halos tiyak na hahantong sa paglitaw ng lumalaban na mga pine nematode, tulad ng ipinakita sa ilang mga peste ng insekto, tulad ng Leptinotarsa decemlineata, Plutella xylostella at ang nematodes na Trichostrongylus colubriformis at Ostertagia circumcincta na unti-unting nabuo. avermectins10,11,12. Samakatuwid, ang mga pattern ng paglaban ay kailangang regular na pag-aralan at ang mga nemaicide ay patuloy na sinusuri upang makahanap ng alternatibo, cost-effective at environment friendly na mga hakbang upang makontrol ang PVD. Sa nakalipas na mga dekada, maraming mga may-akda ang nagmungkahi ng paggamit ng mga extract ng halaman, mahahalagang langis at pabagu-bago ng isip bilang mga ahente ng pagkontrol ng nematode13,14,15,16.
Ipinakita namin kamakailan ang nematicidal activity ng indole, isang intercellular at interkingdom signaling molecule, sa Caenorhabditis elegans 17 . Ang Indole ay isang malawakang intracellular signal sa microbial ecology, na kinokontrol ang maraming function na nakakaapekto sa microbial physiology, spore formation, plasmid stability, drug resistance, biofilm formation, at virulence 18, 19 . Ang aktibidad ng indole at ang mga derivatives nito laban sa iba pang mga pathogen nematodes ay hindi pa napag-aralan. Sa pag-aaral na ito, sinisiyasat namin ang aktibidad ng nematicidal ng 34 na indoles laban sa mga pine nematode at pinaliwanag ang mekanismo ng pagkilos ng pinaka-makapangyarihang 5-iodoindole gamit ang microscopy, time-lapse photography, at molekular docking na mga eksperimento, at tinasa ang mga nakakalason na epekto nito sa mga halaman gamit ang seed germination assay.
Ang mga mataas na konsentrasyon (> 1.0 mM) ng indole ay dati nang naiulat na may nematicidal effect sa nematodes17. Kasunod ng paggamot sa B. xylophilus (mixed life stages) na may indole o 33 iba't ibang indole derivatives sa 1 mM, ang dami ng namamatay ng B. xylophilus ay sinusukat sa pamamagitan ng pagbibilang ng mga buhay at patay na nematode sa kontrol at ginagamot na mga grupo. Limang indoles ang nagpakita ng makabuluhang aktibidad na nematicidal; ang kaligtasan ng hindi ginagamot na control group ay 95 ± 7% pagkatapos ng 24 h. Sa 34 na indoles na nasubok, ang 5-iodoindole at 4-fluoroindole sa 1 mM ay nagdulot ng 100% na namamatay, samantalang ang 5, 6-difluoroindigo, methylindole-7-carboxylate, at 7-iodoindole ay nagdulot ng humigit-kumulang 50% na namamatay (Talahanayan 1).
Epekto ng 5-iodoindole sa pagbuo ng vacuole at metabolismo ng pine wood nematode. (A) Epekto ng avermectin at 5-iodoindole sa adult male nematodes, (B) L1 stage nematode egg at (C) metabolism ng B. xylophilus, (i) vacuoles ay hindi naobserbahan sa 0 h, ang paggamot ay nagresulta sa (ii) vacuoles, (iii) akumulasyon ng maraming vacuoles, (iv) fusions ng vacuoles, (iv) fusions (vi) pagbuo ng mga higanteng vacuoles. Ang mga pulang arrow ay nagpapahiwatig ng pamamaga ng mga vacuole, ang mga asul na arrow ay nagpapahiwatig ng pagsasanib ng mga vacuole at ang mga itim na arrow ay nagpapahiwatig ng mga higanteng vacuoles. Scale bar = 50 μm.
Bilang karagdagan, inilarawan din ng pag-aaral na ito ang sunud-sunod na proseso ng pagkamatay na dulot ng methane sa mga pine nematode (Larawan 4C). Ang methanogenic death ay isang non-apoptotic na uri ng cell death na nauugnay sa akumulasyon ng mga kilalang cytoplasmic vacuoles27. Ang mga morphological defect na naobserbahan sa mga pine nematode ay mukhang malapit na nauugnay sa mekanismo ng pagkamatay na dulot ng methane. Ang pagsusuri sa mikroskopiko sa iba't ibang oras ay nagpakita na ang mga higanteng vacuole ay nabuo pagkatapos ng 20 h ng pagkakalantad sa 5-iodoindole (0.1 mM). Ang mga microscopic vacuoles ay naobserbahan pagkatapos ng 8 h ng paggamot, at ang kanilang bilang ay tumaas pagkatapos ng 12 h. Maraming malalaking vacuole ang naobserbahan pagkatapos ng 14 h. Ang ilang mga fused vacuoles ay malinaw na nakikita pagkatapos ng 12-16 h ng paggamot, na nagpapahiwatig na ang vacuole fusion ay ang batayan ng mekanismo ng kamatayan ng methanogenic. Pagkaraan ng 20 oras, ilang higanteng vacuole ang natagpuan sa buong uod. Ang mga obserbasyong ito ay kumakatawan sa unang ulat ng metuosis sa C. elegans.
Sa 5-iodoindole-treated worm, ang vacuole aggregation at rupture ay naobserbahan din (Fig. 5), bilang ebidensya ng worm bending at vacuole release sa kapaligiran. Ang pagkagambala ng vacuole ay naobserbahan din sa lamad ng kabibi, na karaniwang pinapanatili ng L2 sa panahon ng pagpisa (Karagdagang Fig. S2). Sinusuportahan ng mga obserbasyong ito ang paglahok ng fluid accumulation at osmoregulatory failure, gayundin ang reversible cell injury (RCI), sa proseso ng vacuole formation at suppuration (Fig. 5).
Ang hypothesizing ang papel ng yodo sa naobserbahang pagbuo ng vacuole, sinisiyasat namin ang nematicidal na aktibidad ng sodium iodide (NaI) at potassium iodide (KI). Gayunpaman, sa mga konsentrasyon (0.1, 0.5 o 1 mM), hindi nila naapektuhan ang alinman sa kaligtasan ng nematode o pagbuo ng vacuole (Karagdagang Fig. S5), bagaman ang 1 mM KI ay may bahagyang nematicidal effect. Sa kabilang banda, ang 7-iodoindole (1 o 2 mM), tulad ng 5-iodoindole, ay nag-udyok ng maramihang mga vacuole at structural deformation (Karagdagang Fig. S6). Ang dalawang iodoindoles ay nagpakita ng magkatulad na mga katangian ng phenotypic sa mga pine nematode, samantalang ang NaI at KI ay hindi. Kapansin-pansin, ang indole ay hindi nag-udyok sa pagbuo ng vacuole sa B. xylophilus sa mga konsentrasyon na nasubok (hindi ipinakita ang data). Kaya, kinumpirma ng mga resulta na ang indole-iodine complex ay responsable para sa vacuolization at metabolismo ng B. xylophilus.
Sa mga indoles na sinuri para sa nematicidal activity, ang 5-iodoindole ay may pinakamataas na slip index na -5.89 kcal/mol, na sinusundan ng 7-iodoindole (-4.48 kcal/mol), 4-fluoroindole (-4.33), at indole (-4.03) (Figure 6). Ang malakas na backbone hydrogen bonding ng 5-iodoindole sa leucine 218 ay nagpapatatag sa pagbubuklod nito, samantalang ang lahat ng iba pang indole derivatives ay nagbubuklod sa serine 260 sa pamamagitan ng side chain hydrogen bonds. Sa iba pang mga modelong iodoindoles, ang 2-iodoindole ay may binding value na -5.248 kcal/mol, na dahil sa pangunahing hydrogen bond nito na may leucine 218. Kabilang sa iba pang kilalang binding ang 3-iodoindole (-4.3 kcal/mol), 4-iodoindole (-4.0 kcal/mol), at (6-2. S8). Karamihan sa mga halogenated na indoles at indole mismo, maliban sa 5-iodoindole at 2-iodoindole, ay bumubuo ng isang bono na may serine 260. Ang katotohanan na ang hydrogen bonding sa leucine 218 ay nagpapahiwatig ng mahusay na receptor-ligand binding, gaya ng naobserbahan para sa ivermectin (Supplement Fig. S7), nagpapatunay na ang 5-iodole, indoctin2iodole, at 5-iodoctin2iodole magbigkis nang mahigpit sa aktibong site ng GluCL receptor sa pamamagitan ng leucine 218 (Larawan 6 at Karagdagang Larawan S8). Iminumungkahi namin na ang pagbubuklod na ito ay kinakailangan upang mapanatili ang bukas na istraktura ng butas ng GluCL complex at sa pamamagitan ng mahigpit na pagbubuklod sa aktibong site ng receptor ng GluCL, 5-iodoindole, 2-iodoindole, avermectin at ivermectin sa gayon ay mapanatili ang bukas na channel ng ion at pinapayagan ang pag-uptake ng likido.
Molecular docking ng indole at halogenated indole sa GluCL. Nagbubuklod na mga oryentasyon ng (A) indole, (B) 4-fluoroindole, (C) 7-iodoindole, at (D) 5-iodoindole ligands sa aktibong site ng GluCL. Ang protina ay kinakatawan ng isang laso, at ang backbone hydrogen bond ay ipinapakita bilang mga dilaw na tuldok na linya. Ang (A′), (B′), (C′), at (D′) ay nagpapakita ng mga pakikipag-ugnayan ng kaukulang mga ligand sa nakapalibot na mga residue ng amino acid, at ang mga side-chain na hydrogen bond ay ipinahiwatig ng mga pink na tuldok na arrow.
Ang mga eksperimento ay isinagawa upang suriin ang nakakalason na epekto ng 5-iodoindole sa pagtubo ng mga buto ng repolyo at labanos. Ang 5-iodoindole (0.05 o 0.1 mM) o avermectin (10 μg/mL) ay may kaunti o walang epekto sa paunang pagtubo at paglitaw ng plantlet (Larawan 7). Bilang karagdagan, walang makabuluhang pagkakaiba ang natagpuan sa pagitan ng rate ng pagtubo ng mga hindi ginagamot na kontrol at mga buto na ginagamot sa 5-iodoindole o avermectin. Ang epekto sa taproot elongation at ang bilang ng mga lateral roots na nabuo ay hindi gaanong mahalaga, kahit na 1 mM (10 beses ang aktibong konsentrasyon nito) ng 5-iodoindole ay bahagyang naantala ang pagbuo ng mga lateral roots. Ang mga resultang ito ay nagpapahiwatig na ang 5-iodoindole ay hindi nakakalason sa mga selula ng halaman at hindi nakakasagabal sa mga proseso ng pagpapaunlad ng halaman sa mga konsentrasyon na pinag-aralan.
Epekto ng 5-iodoindole sa pagtubo ng binhi. Pagsibol, pag-usbong at pag-ilid na pag-ugat ng B. oleracea at R. raphanistrum na mga buto sa Murashige at Skoog agar medium na mayroon o walang avermectin o 5-iodoindole. Ang pagtubo ay naitala pagkatapos ng 3 araw ng pagpapapisa ng itlog sa 22°C.
Ang pag-aaral na ito ay nag-uulat ng ilang kaso ng pagpatay ng nematode ng mga indoles. Mahalaga, ito ang unang ulat ng iodoindole inducing methylation (isang proseso na dulot ng akumulasyon ng maliliit na vacuoles na unti-unting nagsasama sa mga higanteng vacuoles, na kalaunan ay humahantong sa pagkalagot ng lamad at pagkamatay) sa mga pine needle, na may iodoindole na nagpapakita ng makabuluhang mga katangian ng nematicidal na katulad ng sa komersyal na nematid avermectin.
Ang mga Indoles ay dati nang naiulat na nagsasagawa ng maraming mga pag-andar ng senyas sa mga prokaryote at eukaryotes, kabilang ang pagsugpo/pagbuo ng biofilm, kaligtasan ng bakterya, at pathogenicity19,32,33,34. Kamakailan lamang, ang mga potensyal na therapeutic effect ng halogenated indoles, indole alkaloids, at semisynthetic indole derivatives ay nakakuha ng malawak na interes sa pananaliksik35,36,37. Halimbawa, ang mga halogenated na indoles ay ipinakita na pumatay sa patuloy na Escherichia coli at Staphylococcus aureus cells37. Bilang karagdagan, ito ay isang siyentipikong interes na pag-aralan ang bisa ng mga halogenated na indoles laban sa iba pang mga species, genera, at kaharian, at ang pag-aaral na ito ay isang hakbang patungo sa pagkamit ng layuning ito.
Dito, nagmumungkahi kami ng isang mekanismo para sa 5-iodoindole-induced lethality sa C. elegans batay sa reversible cell injury (RCI) at methylation (Figures 4C at 5). Ang mga pagbabago sa edema tulad ng puffiness at vacuolar degeneration ay mga tagapagpahiwatig ng RCI at methylation, na ipinakita bilang mga higanteng vacuole sa cytoplasm48,49. Ang RCI ay nakakasagabal sa produksyon ng enerhiya sa pamamagitan ng pagbabawas ng produksyon ng ATP, na nagiging sanhi ng pagkabigo ng ATPase pump, o pagkagambala sa mga lamad ng cell at nagiging sanhi ng mabilis na pag-agos ng Na+, Ca2+, at tubig50,51,52. Ang mga intracytoplasmic vacuole ay bumangon sa mga selula ng hayop bilang resulta ng akumulasyon ng likido sa cytoplasm dahil sa pag-agos ng Ca2+ at tubig53. Kapansin-pansin, ang mekanismong ito ng pagkasira ng cell ay nababaligtad kung ang pinsala ay pansamantala at ang mga selula ay nagsimulang gumawa ng ATP para sa isang tiyak na tagal ng panahon, ngunit kung ang pinsala ay nagpapatuloy o lumala, ang mga selula ay namamatay.54 Ang aming mga obserbasyon ay nagpapakita na ang mga nematode na ginagamot sa 5-iodoindole ay hindi maibabalik ang normal na biosynthesis pagkatapos ng pagkakalantad sa mga kondisyon ng stress.
Ang methylation phenotype na idinulot ng 5-iodoindole sa B. xylophilus ay maaaring dahil sa pagkakaroon ng iodine at molecular distribution nito, dahil ang 7-iodoindole ay may mas kaunting inhibitory na epekto sa B. xylophilus kaysa sa 5-iodoindole (Talahanayan 1 at Karagdagang Larawan S6). Ang mga resulta na ito ay bahagyang naaayon sa mga pag-aaral ng Maltese et al. (2014), na nag-ulat na ang pagsasalin ng pyridyl nitrogen moiety sa indole mula sa para- hanggang sa meta-posisyon ay tinanggal ang vacuolization, pag-iwas sa paglago, at cytotoxicity sa mga U251 na selula, na nagmumungkahi na ang pakikipag-ugnayan ng molekula sa isang tiyak na aktibong site sa protina ay kritikal27,44,45. Ang mga pakikipag-ugnayan sa pagitan ng indole o halogenated indoles at GluCL receptors na sinusunod sa pag-aaral na ito ay sumusuporta din sa paniwala na ito, dahil ang 5- at 2-iodoindole ay natagpuan na nagbubuklod sa GluCL receptors nang mas malakas kaysa sa iba pang mga indoles na napagmasdan (Larawan 6 at Karagdagang Larawan S8). Ang iodine sa ikalawa o ikalimang posisyon ng indole ay natagpuan na nagbubuklod sa leucine 218 ng GluCL receptor sa pamamagitan ng backbone hydrogen bond, samantalang ang iba pang mga halogenated indoles at indole mismo ay bumubuo ng mahina na side-chain na hydrogen bond na may serine 260 (Larawan 6). Kaya't iniisip namin na ang lokalisasyon ng halogen ay gumaganap ng isang mahalagang papel sa induction ng vacuolar degeneration, samantalang ang mahigpit na pagbubuklod ng 5-iodoindole ay nagpapanatili sa bukas na channel ng ion, sa gayon ay nagpapahintulot sa mabilis na pag-agos ng likido at pagkalagot ng vacuole. Gayunpaman, ang detalyadong mekanismo ng pagkilos ng 5-iodoindole ay nananatiling matukoy.
Bago ang praktikal na paggamit ng 5-iodoindole, dapat suriin ang nakakalason na epekto nito sa mga halaman. Ang aming mga eksperimento sa pagtubo ng binhi ay nagpakita na ang 5-iodoindole ay walang negatibong epekto sa pagtubo ng binhi o mga kasunod na proseso ng pag-unlad sa mga konsentrasyon na pinag-aralan (Larawan 7). Kaya, ang pag-aaral na ito ay nagbibigay ng batayan para sa paggamit ng 5-iodoindole sa ekolohikal na kapaligiran upang makontrol ang pinsala ng pine nematodes sa mga pine tree.
Ang mga nakaraang ulat ay nagpakita na ang indole-based na therapy ay kumakatawan sa isang potensyal na diskarte upang matugunan ang problema ng antibiotic resistance at pag-unlad ng cancer55. Bilang karagdagan, ang mga indoles ay nagtataglay ng mga aktibidad na antibacterial, anticancer, antioxidant, anti-inflammatory, antidiabetic, antiviral, antiproliferative at antituberculosis at maaaring magsilbing promising na batayan para sa pagbuo ng gamot56,57. Iminumungkahi ng pag-aaral na ito sa unang pagkakataon ang potensyal na paggamit ng yodo bilang isang antiparasitic at anthelmintic agent.
Natuklasan ang Avermectin tatlong dekada na ang nakalilipas at nanalo ng Nobel Prize noong 2015, at ang paggamit nito bilang anthelmintic ay aktibong nagpapatuloy. Gayunpaman, dahil sa mabilis na pag-unlad ng paglaban sa mga avermectins sa mga nematode at mga peste ng insekto, isang alternatibo, mura, at environment friendly na diskarte ay kailangan upang makontrol ang impeksyon ng PWN sa mga pine tree. Iniuulat din ng pag-aaral na ito ang mekanismo kung saan pinapatay ng 5-iodoindole ang mga pine nematode at ang 5-iodoindole ay may mababang toxicity sa mga selula ng halaman, na nagbubukas ng magagandang prospect para sa hinaharap na komersyal na aplikasyon.
Ang lahat ng mga eksperimento ay inaprubahan ng Ethics Committee ng Yeungnam University, Gyeongsan, Korea, at ang mga pamamaraan ay isinagawa alinsunod sa mga alituntunin ng Ethics Committee ng Yeungnam University.
Ang mga eksperimento sa pagpapapisa ng itlog ay isinagawa gamit ang mga itinatag na pamamaraan43. Upang masuri ang mga rate ng pagpisa (HR), ang 1-araw na pang-adultong nematode (humigit-kumulang 100 babae at 100 lalaki) ay inilipat sa mga pagkaing Petri na naglalaman ng fungus at pinahintulutang lumaki sa loob ng 24 na oras. Ang mga itlog ay pagkatapos ay ihiwalay at ginagamot ng 5-iodoindole (0.05 mM at 0.1 mM) o avermectin (10 μg/ml) bilang isang suspensyon sa sterile distilled water. Ang mga suspensyon na ito (500 μl; humigit-kumulang 100 itlog) ay inilipat sa mga balon ng isang 24-well tissue culture plate at natupok sa 22 °C. Ang mga bilang ng L2 ay ginawa pagkatapos ng 24 na oras ng pagpapapisa ng itlog ngunit itinuturing na patay kung ang mga cell ay hindi gumagalaw kapag pinasigla ng isang pinong platinum wire. Ang eksperimentong ito ay isinagawa sa dalawang yugto, bawat isa ay may anim na pag-uulit. Ang data mula sa parehong mga eksperimento ay pinagsama at ipinakita. Ang porsyento ng HR ay kinakalkula tulad ng sumusunod:
Ang larval mortality ay nasuri gamit ang mga naunang binuo na pamamaraan. Ang mga itlog ng nematode ay nakolekta at ang mga embryo ay na-synchronize sa pamamagitan ng pagpisa sa sterile distilled water upang makabuo ng L2 stage larvae. Ang naka-synchronize na larvae (humigit-kumulang 500 nematodes) ay ginagamot ng 5-iodoindole (0.05 mM at 0.1 mM) o avermectin (10 μg/ml) at pinalaki sa mga plato ng B. cinerea Petri. Pagkatapos ng 48 h ng pagpapapisa ng itlog sa 22 ° C, ang mga nematode ay nakolekta sa sterile distilled water at sinuri para sa pagkakaroon ng mga yugto ng L2, L3, at L4. Ang pagkakaroon ng mga yugto ng L3 at L4 ay nagpapahiwatig ng pagbabagong-anyo ng larval, samantalang ang pagkakaroon ng yugto ng L2 ay nagpapahiwatig ng walang pagbabago. Ang mga imahe ay nakuha gamit ang iRiS™ Digital Cell Imaging System. Ang eksperimentong ito ay isinagawa sa dalawang yugto, bawat isa ay may anim na pag-uulit. Ang data mula sa parehong mga eksperimento ay pinagsama at ipinakita.
Ang toxicity ng 5-iodoindole at avermectin sa mga buto ay nasuri gamit ang germination tests sa Murashige at Skoog agar plates.62 B. oleracea at R. raphanistrum na buto ay unang ibinabad sa sterile distilled water sa loob ng isang araw, hinugasan ng 1 ml 100% ethanol, na isterilisado ng 1 ml 100% ethanol (komersyal na chlorite503% 1 ml) na buto. min, at hugasan ng limang beses na may 1 ml na sterile na tubig. Ang mga isterilisadong buto ay idiniin sa mga germination agar plate na naglalaman ng 0.86 g/l (0.2X) Murashige at Skoog medium at 0.7% bacteriological agar na mayroon o walang 5-iodoindole o avermectin. Ang mga plato ay pagkatapos ay incubated sa 22 ° C, at ang mga imahe ay kinuha pagkatapos ng 3 araw ng pagpapapisa ng itlog. Ang eksperimentong ito ay isinagawa sa dalawang yugto, bawat isa ay may anim na pag-uulit.
Oras ng post: Peb-26-2025